EA0202 LAMP Fluorescent Master Mix(Liquid)

产品简介

LAMP 是一种新型核酸扩增技术。采用46条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物, 依赖与Bst DNA聚合酶的强链置换活性,在30-60分钟内DNA扩增可达109-1010倍。

2 × LAMP Master Mix with Dye 用于模板DNA的检测,提供快速一步法的解决方案。该预混液采用Bst DNA聚合酶的优化配方,可快速地进行环介导等温扩增(LAMP)反应。该预混液包含酶MixdNTP、荧光染料和反应Buffer在内的所有必需组分,只需加入用于等温扩增的引物和模板,进行实时荧光检测。即可在30-50min内得到扩增结果。

 

产品规格

名称

规格(100T

2 × LAMP Master Mix with Dye

0.625 mL × 2

 

 

 

保存条件

干冰运输,请注意避免反复冻融。-20 储存,长期储存放置-80 ,有效期1

 

实验流程

1. 本产品在-20 取出后会有轻微沉淀物,需室温解冻混匀至沉淀消失,离心后使用。

2. 按以下组分配置反应混合液

组分

体积

2 × LAMP Master Mix with Dye

12.5 μL

10 × LAMP Primer Mix*

2.5 μL

模板 DNA  

X μL

补充至25 μL

 

 

 

 

 

 

*引物终浓度推荐:1.6 μM FIP/BIP0.4 μM LF/LB0.2 μMF3/B3。轻轻混匀并离心。

3. 置于荧光定量仪65 反应,每分钟收集一次荧光信号设置35-45 cycles

4. 热失活条件:85 反应5-10 min

(在LAMP反应结束后一般禁止将反应管盖打开,如后续进行电泳等开盖操作,务必进行热失活操作,以气溶胶污染)。

 

注意事项

1. 建议每次实验增加无模板阴性对照。

2. 建议试剂配制和模板加入的操作在不同区域进行,以免造成环

3. 境的污染,影响后续实验的进行。

4. 为了保证重复良好的结果,建议模板DNA最后加入。

5. 建议质粒DNA加入量在1fg-10 ng内,基因组DNA加入量在1pg-100 ng内。

6. 若阴性检出率过高,可适当进行反应温度调整,本产品可在63 -72 ℃温度区间进行调整。

7. 推荐使用Primer在线设计软件 http://primerexplorer.jp/e/

 

应用实例

LAMP扩增N基因质粒