EA0202 LAMP Fluorescent Master Mix(Liquid)
产品简介
LAMP 是一种新型核酸扩增技术。采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物, 依赖与Bst DNA聚合酶的强链置换活性,在30-60分钟内DNA扩增可达109-1010倍。
2 × LAMP Master Mix with Dye 用于模板DNA的检测,提供快速一步法的解决方案。该预混液采用Bst DNA聚合酶的优化配方,可快速地进行环介导等温扩增(LAMP)反应。该预混液包含酶Mix、dNTP、荧光染料和反应Buffer在内的所有必需组分,只需加入用于等温扩增的引物和模板,进行实时荧光检测。即可在30-50min内得到扩增结果。
产品规格
名称 |
规格(100T) |
2 × LAMP Master Mix with Dye |
0.625 mL × 2 |
保存条件
干冰运输,请注意避免反复冻融。-20 ℃储存,长期储存放置-80 ℃,有效期1年。
实验流程
1. 本产品在-20 ℃取出后会有轻微沉淀物,需室温解冻混匀至沉淀消失,离心后使用。
2. 按以下组分配置反应混合液
组分 |
体积 |
2 × LAMP Master Mix with Dye |
12.5 μL |
10 × LAMP Primer Mix* |
2.5 μL |
模板 DNA |
X μL |
水 |
补充至25 μL |
*引物终浓度推荐:1.6 μM FIP/BIP,0.4 μM LF/LB,0.2 μMF3/B3。轻轻混匀并离心。
3. 置于荧光定量仪65 ℃反应,每分钟收集一次荧光信号,设置35-45 cycles。
4. 热失活条件:85 ℃反应5-10 min。
(在LAMP反应结束后一般禁止将反应管盖打开,如后续进行电泳等开盖操作,务必进行热失活操作,以防气溶胶污染)。
注意事项
1. 建议每次实验增加无模板阴性对照。
2. 建议试剂配制和模板加入的操作在不同区域进行,以免造成环
3. 境的污染,影响后续实验的进行。
4. 为了保证重复良好的结果,建议模板DNA最后加入。
5. 建议质粒DNA加入量在1fg-10 ng内,基因组DNA加入量在1pg-100 ng内。
6. 若阴性检出率过高,可适当进行反应温度调整,本产品可在63 ℃-72 ℃温度区间进行调整。
7. 推荐使用Primer在线设计软件 http://primerexplorer.jp/e/
应用实例
LAMP扩增N基因质粒