E00201 CRISPR-Cas12a，LbCas12a (Cpf1)

背景介绍：

Cpf1核酸酶（Cas12a）是依赖于RNA介导的内切核酸酶，在靶标DNA存在PAM的情况下，可特异地切割靶标双链DNA。Lb Cas12a（Cpf1）核酸酶识别富含T的TTTN PAM序列，所需gRNA短，仅40-44个碱基。其有两个核定位信号，提高运输到细胞核的效率。其切割产物为5’突出末端。该酶的活性温度区间为16℃-48℃。

Cpf1蛋白有诸多优点：（1）Cpf1只需要单个crRNA，且体积更小、更易被递送至细胞中；（2）Cpf1切割后产生粘性末端，更利于基因组精确编辑；（3）Cpf1的切割位点远离其识别位点，为连续多次编辑提供了可能性；（4）Cpf1识别的PAM序列与Cas9不同，因此提供了不同编辑位点的选择；针对不同的Cpf1蛋白，其识别靶标所需的PAM位点不同，其中部分Cpf1蛋白识别TTN位点，部分Cpf1蛋白识别TTTN位点。

图 Cas12a-crRNA（Cas12a RNP）示意图（acDNA，靶标DNA链）

产品说明：

目前为止已发现6种类型和超过20种的CRISPR-Cas系统亚型。 其中，CRISPR-Cas12a是第二类（V型）用于编辑哺乳动物基因组的CRISPR-Cas系统。Cas12a具有独特的功能，可以与CRISPR-Cas9系统进行互补。Cas12a ( Cpf1) 蛋白具有类似于Cas9的RuvC内切核酸酶结构域。此外，Cpf1不具有HNH内切酶结构域，并且Cas12a的N-末端不具有Cas9的α-螺旋识别叶。Cas12a执行剪切后的DNA双链断裂引入了4或5个核苷酸突出的粘性末端，研究表明LbCas12a-crRNA复合物与互补单链DNA或者双链DNA的结合释放出强大的非特异性ssDNA反式切割活性。这促使Cas 12a可以作为一种新型的基因检测和成像的工具。

产品特点：

Cpf1不需要tracrRNA，只需要crRNA，非常有利于基因组编辑；Cas12a比Cas9小，还具有较小的crRNA分子（接近Cas9的总sgRNA的一半）；Cas12a-crRNA复合物通过识别富含T的PAM基序来切割靶DNA，与Cas9需要富含G的PAM相反。

产品用途：

可用于基因编辑；新型基因检测和成像等。

规格参数：

货号：E00201                    浓度：5000 pmol / ml                  规格：100 pmol / 1000 pmol / 2000 pmol。

质量控制：

纯度：经高效液相色谱（SEC-HPLC）和SDS-PAGE检测，纯度大于95%。

使用说明：

4℃运输；-20℃储存，长期储存于-80℃，避免反复冻融。

在-20℃条件下有效期24个月。

仅供科研或生产使用，不可直接应用于人体。

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参考文献：

[1] Li Hui, et al. 2021. Anal Chem. 93:3209-3216.

[2] Zetsche, B., et. al. 2015. Cell. 163:759-771.