E00801 mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase（mRNA Cap2氧甲基转移酶）

货号：E00801

种属：Vaccinia

产品介绍：

mRNA Cap 2氧甲基转移酶是一种来自于牛痘病毒的重组蛋白。该酶可以在RNA的5’末端紧挨帽结构的第一个核苷酸的2’-O位置处添加一个甲基基团。该酶利用SAM作为甲基供体来甲基化加帽RNA（Cap-0），从而形成Cap-1结构。Cap-1结构能增强mRNA的翻译效率，因此可有助于改善mRNA转染和显微注射实验中的表达；最近发现，Cap-1结构中的2'-O-甲基化有助于 mRNA 在体内某些细胞类型中逃避天然免疫反应。该酶需要有m7GpppN即7-甲基鸟苷帽结构的RNA作为底物。它不能利用5’末端带有pN、ppN、pppN或GpppN的RNA。

图 mRNA 5’帽结构示意图

保存条件：

冰袋运输，-20℃保存，一年稳定。建议分装保存，避免反复冻融。

酶活定义：

一单位（U）定义为：在37℃条件下1h内甲基化10pmol的80nt带帽RNA转录物所需的酶量。

使用方法：

1、使用RNase-free 水将适量 Capped RNA 稀释至16μl；

2、将稀释的RNA 在65℃条件下加热处理5min，反应后冰上放置 5min；

3、按下表（1）配置反应体系（适用于10μg以内Capped RNA的甲基化反应）；

4、37℃条件下孵育1h（对与目的片段长度小于200nt RNA，可将孵育时间增加到2h）；

5、10×Capping Buffer的配置如下：500mM Tris-HCl、pH8.0、50mM KCl、10mM MgCl2、10mM DTT。

表1：20μL反应体系配置：

注意事项：

1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2、用于实验反应的RNA在用之前应进行纯化处理并溶于RNase-free water且溶液中不能含任何的EDTA和盐离子；

3、反应之前推荐65℃加热5min以去除RNA的二级结构。如果转录产物的5´端结构复杂，可将时间延长至10min；

4、SAM试剂在pH 7–8，37°C条件下稳定性较差，需要现用现配。可预先计算好所需SAM的用量，在反应前将32 mM的储备液稀释成4 mM的工作液。为防止SAM降解，工作液应保存于冰上。    

参考文献：

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